Soup-up AAV & LNP sample prep with Big Tuna
Aplikace | 2021 | Unchained LabsInstrumentace
Genová terapie klade vysoké nároky na přípravu a charakterizaci vektorů, jako jsou lipidové nanočástice (LNP) a adeno-asociované viry (AAV). Rychlá a efektivní výměna pufru a koncentrace vzorků je zásadní pro zachování stability, integrity a účinnosti terapeutických molekul.
Tato poznámka představuje automatizovaný systém Big Tuna pro vysokoprůchodové ultrafiltračně-diafiltrační (UF/DF) zpracování vzorků LNP, AAV a DNA. Cílem je ukázat dosažení vysoké míry výměny pufru, koncentrační kapacity a zachování klíčových vlastností vzorků při různé velikosti a složení molekul.
Systém Big Tuna využívá tlakové UF/DF metody s jemným orbitálním mícháním pro rovnoměrný průtok a prevenci usazování na membráně. Instrumentace zahrnuje:
Pro LNP byl dosažen průměr 99,7 % výměny pufru a zachování enkapsulace ~96,5 % (cílová koncentrace 78,4 µg/ml, reálná 83,5 µg/ml). AAV příprava vykázala ~97 % výměnu a koncentraci na 2,37×10^13 vp/ml se zachováním poměru empty/full v rozmezí 28/72 až 36/64. DNA desaltací bylo dosaženo >97 % výměny a koncentrace ~7 mg/ml. Optimalizované parametry tlaku a objemových cyklů zajistily rychlý průběh a konzistentní výsledky pro různé molekulární velikosti.
Automatizace eliminuje manuální kroky, zkracuje dobu přípravy vzorků a zvyšuje reprodukovatelnost. Metoda umožňuje paralelní zpracování 24–96 vzorků a je snadno škálovatelná, což je klíčové pro výzkum, QA/QC a průmyslovou výrobu genové terapie.
Integrace on-line monitoringu, rozšíření automatizace s umělou inteligencí a zvětšení objemu zpracování představují další kroky. Kombinace s dalšími analytickými technologiemi (HPLC, MS) či mikrofluidními platformami posune efektivitu a kvalitu přípravy vzorků na novou úroveň.
Big Tuna nabízí univerzální řešení pro efektivní výměnu pufru a koncentraci vzorků v oblasti genové terapie, zajišťuje vysokou výtěžnost, zachování integrity a výrazné zkrácení času přípravy.
Příprava vzorků
ZaměřeníLipidomika, Proteomika
VýrobceUnchained Labs
Souhrn
Význam tématu
Genová terapie klade vysoké nároky na přípravu a charakterizaci vektorů, jako jsou lipidové nanočástice (LNP) a adeno-asociované viry (AAV). Rychlá a efektivní výměna pufru a koncentrace vzorků je zásadní pro zachování stability, integrity a účinnosti terapeutických molekul.
Cíle a přehled studie / článku
Tato poznámka představuje automatizovaný systém Big Tuna pro vysokoprůchodové ultrafiltračně-diafiltrační (UF/DF) zpracování vzorků LNP, AAV a DNA. Cílem je ukázat dosažení vysoké míry výměny pufru, koncentrační kapacity a zachování klíčových vlastností vzorků při různé velikosti a složení molekul.
Použitá metodika a instrumentace
Systém Big Tuna využívá tlakové UF/DF metody s jemným orbitálním mícháním pro rovnoměrný průtok a prevenci usazování na membráně. Instrumentace zahrnuje:
- Unfilter 96 a Unfilter 24 filtrační destičky (30 a 100 kDa)
- Big Tuna automační přístroj (Unchained Labs)
- SpectraMax i3 (Molecular Devices) s RiboGreen® assay pro stanovení enkapsulace
- Stunner AAV Quant software pro analýzu koncentrace a poměru empty/full kapsid
- Lunatic UV/Vis (Unchained Labs) pro kvantifikaci DNA a proteinů
Hlavní výsledky a diskuse
Pro LNP byl dosažen průměr 99,7 % výměny pufru a zachování enkapsulace ~96,5 % (cílová koncentrace 78,4 µg/ml, reálná 83,5 µg/ml). AAV příprava vykázala ~97 % výměnu a koncentraci na 2,37×10^13 vp/ml se zachováním poměru empty/full v rozmezí 28/72 až 36/64. DNA desaltací bylo dosaženo >97 % výměny a koncentrace ~7 mg/ml. Optimalizované parametry tlaku a objemových cyklů zajistily rychlý průběh a konzistentní výsledky pro různé molekulární velikosti.
Přínosy a praktické využití metody
Automatizace eliminuje manuální kroky, zkracuje dobu přípravy vzorků a zvyšuje reprodukovatelnost. Metoda umožňuje paralelní zpracování 24–96 vzorků a je snadno škálovatelná, což je klíčové pro výzkum, QA/QC a průmyslovou výrobu genové terapie.
Budoucí trendy a možnosti využití
Integrace on-line monitoringu, rozšíření automatizace s umělou inteligencí a zvětšení objemu zpracování představují další kroky. Kombinace s dalšími analytickými technologiemi (HPLC, MS) či mikrofluidními platformami posune efektivitu a kvalitu přípravy vzorků na novou úroveň.
Závěr
Big Tuna nabízí univerzální řešení pro efektivní výměnu pufru a koncentraci vzorků v oblasti genové terapie, zajišťuje vysokou výtěžnost, zachování integrity a výrazné zkrácení času přípravy.
Reference
- Unchained Labs. Soup-up AAV & LNP sample prep with Big Tuna. Application Note Rev A, 2021.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Epic Gene Therapy Tools
2021|Unchained Labs|Brožury a specifikace
Epic Gene Therapy Tools Combine and conquer Stunner is the only system that pulls together UV/Vis concentration, dynamic light scattering (DLS) and static light scattering (SLS) data from the same 2 µL sample. Dig in to your AAV by bringing…
Klíčová slova
titer, titercapsid, capsidcapsids, capsidsaav, aavhydrodynamic, hydrodynamicfull, fullssdna, ssdnaempty, emptydls, dlsdiameter, diameteramplitude, amplitudesls, slstuna, tunaaggregated, aggregatedtotal
Explore AAV buffers and stability with Big Tuna and Uncle
2020|Unchained Labs|Aplikace
APPLICATION NOTE Explore AAV buffers and stability with Big Tuna and Uncle Introduction A Adeno-associated virus (AAV) vectors endure a lot of stress when exploring the unknowns of a purification process: buffer salts, pH and ionic strength all impact stability…
Klíčová slova
aav, aavtuna, tunabuffer, bufferuncle, unclebig, bigbuffers, buffersstability, stabilityexchange, exchangeaggregation, aggregationexplore, exploreexchanged, exchangedconcentrated, concentratedejection, ejectioncapsid, capsidgenome
Big Tuna
2023|Unchained Labs|Brožury a specifikace
Cut loose from manual buffer exchange Buffer exchange and sample concentration are the time consuming, hands-on chores you have to deal with before all the things you really want to do. Big Tuna is a fully automated, high-throughput buffer exchange…
Klíčová slova
unc, unctuna, tunaunchained, unchainedbig, bighai, hained, nedexchange, exchangelabs, labshain, hainbuffer, bufferrefill, refillfreak, freakparty, partylab, labcda
Fast track formulation pH screening with automated buffer exchange on Big Tuna
2019|Unchained Labs|Aplikace
Application Note Fast track formulation pH screening with automated buffer exchange on Big Tuna Introduction The critical process of screening formulation buffers to optimize stability is labor intensive and time consuming, which are often limiting factors in biologics development. The…
Klíčová slova
tuna, tunabig, bigbuffer, bufferexchange, exchangeformulation, formulationcycle, cyclevolume, volumeprotein, proteinlabs, labsfinal, finalscreening, screeningtrack, trackaverage, averagehai, hained
