Spot-on UV/Vis accuracy with Lunatic & Stunner

Význam tématu

Validace přesnosti a spolehlivosti UV/Vis spektrometrů je klíčová součást vývoje a kontroly kvality biologických vzorků. Rychlé, nízkoobjemové a citlivé metody měření koncentrace bílkovin a nukleových kyselin usnadňují laboratorní workflow a zajišťují důvěru ve výsledky měření.

Cíle a přehled studie

Studie popisuje způsoby ověření přesnosti, linearity a preciznosti dvou mikrolitrových UV/Vis spektrometrů Lunatic a Stunner. Ověření probíhá pomocí certifikovaných referenčních materiálů NISTmAb (monoklonální IgG1K), SRM 2082 (triptofan a uracil) a komerčního Fundamentals kitu s různými koncentracemi L-triptofanu.

Použitá metodika a instrumentace

• Instrumentace: Lunatic (mikrovolumetrické UV/Vis spektrometry s pevnou optickou dráhou), Stunner (UV/Vis & DLS kombinace)
• Referenční materiály: NIST RM 8671 (NISTmAb), NIST SRM 2082 (triptofan/uracil), Fundamentals Check kit (5 koncentrací L-triptofanu)
• Měření: 2 µL vzorku v oktaplikátu, pět přístrojů, porovnání naměřených hodnot s referenčními, výpočty dle modifikovaného Beerova zákona

Hlavní výsledky a diskuse

Naměřené koncentrace i vypočtené optické dráhy u všech testovaných NIST standardů byly v rámci ±2 % od referenčních hodnot, průměrné odchylky dokonce pod 1 %. Lineární regrese naměřených vs. cílových koncentrací triptofanu vykázala korelační koeficient R2 = 0,9999 a sklon téměř 1. Testy s gravimetricky ředěnými proteiny (HSA, IgG) v rozsahu 0,1–200 mg/mL prokázaly výbornou meziplášťovou a meziinstrumentovou přesnost s velmi nízkým rozptylem výsledků.

Přínosy a praktické využití metody

• Minimální spotřeba vzorku (2 µL) a vysoká propustnost až 96 vzorků najednou
• Rychlá automatizovaná validace instrumentu pro QA/QC či metody pro farmaceutický průmysl
• Jednoduchá integrace certifikovaných referenčních standardů včetně software pro automatizovanou analýzu

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření kompatibility s vysoce viskózními vzorky (až 100 cP), vylepšené mikrofluidní moduly pro vysokou propustnost a integrace s datovou analýzou pomocí strojového učení. Rozvoj online monitoringu a automatizovaných kontrol kvality biologických procesů nabízí další aplikační možnosti.

Závěr

Spektrometry Lunatic a Stunner poskytují prokázanou vysokou přesnost, preciznost a linearitu měření koncentrace bílkovin a nukleových kyselin v širokém dynamickém rozsahu. Kombinace certifikovaných referenčních materiálů a přehledného software umožňuje rychlou a spolehlivou verifikaci instrumentu.

Reference

• RM 8671, NISTmAb, Humanized IgG1K Monoclonal Antibody, NIST
• SRM 2082, Pathlength Absorbance Standards for Microliter Volume Spectrophotometers, NIST
• United States Pharmacopeia 42 Chapter <857> Ultraviolent-Visible Spectroscopy