Determine Protein Concentration Using Microvolumes with the Agilent Cary 60 UV-Vis Spectrophotometer

Význam tématu

Stanovení koncentrace proteinů je klíčové pro biochemické a biotechnologické aplikace, včetně vývoje analýz, kontroly kvality a výzkumu enzymových reakcí. Použití mikrovzorků šetří cenný materiál, zvyšuje produktivitu a minimalizuje chyby spojené s ředěním vzorků.

Cíle a přehled studie / článku

Prezentovaný datasheet popisuje využití spektrofotometru Agilent Cary 60 UV-Vis ve spojení s ultra-mikrovobjemovou kyvetou. Cílem je demonstrovat rychlou, přesnou a opakovatelnou metodu přímého stanovení proteinů v objemech již od 3 µl, bez nutnosti ředění.

Použitá metodika a instrumentace

• Metoda: přímé měření absorbance mikrovzorku proteinu (BSA) při 280 nm, bez destrukce vzorku.
• Ultra-mikrovobjemová kyveta: kapacita 3–40 µl, zrcadlové víčko s optickou délkou 1,0 mm a 0,2 mm pro rozšíření dynamického rozsahu.
• Spektrofotometr: Agilent Cary 60 UV-Vis (možné i převzetí z modelu Cary 50), kompatibilní s automatickými měniči kyvet a termostatovanými držáky.

Hlavní výsledky a diskuse

• Vynikající fotometrická linearita až do 2,3 Abs (1,0 mm) a ekvivalentních 23 Abs a 115 Abs s 0,2mm kapou, umožňující měření BSA v rozmezí 0–190 mg/ml bez ředění.
• Limit detekce rozšířený na 0,001 mg/ml při použití standardní 10mm kyvety.
• Rychlé doplňování a čištění vzorků bez rizika carryover, odstranění časově náročných čistících protokolů.

Přínosy a praktické využití metody

• Minimalizace spotřeby vzorku při zachování přesnosti a reprodukovatelnosti.
• Zrychlení pracovních postupů v laboratoři, eliminace ředění vzorků.
• Široké možnosti využití v biologických UV-Vis měřeních, enzymových kinetikách a QC v biotechnologii.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se širší integrace s automatizovanými systémy pro vysokoprůchodové měření, využití v mikrotečkách pro screening, rozšíření aplikací na kvantifikaci nukleových kyselin a proteomiku bez značení. Dále kombinace s teplotně kontrolovanými buňkami umožní pokročilé kinetické studie.

Závěr

Agilent Cary 60 UV-Vis s ultra-mikrovobjemovou kyvetou představuje flexibilní, rychlou a spolehlivou metodu pro stanovení koncentrace proteinů v malých objemech. Díky širokému rozsahu měření a snadné manipulaci s vzorky je ideální pro moderní výzkumné a průmyslové laboratoře.

Reference

• Agilent Technologies. Cary 60 UV-Vis Data Sheet, 5990-7944EN, April 2022.