The Cary Eclipse—the only fluorescence instrument for temperature-based applications

Význam tématu

Fluorescenční spektroskopie s přesnou teplotní kontrolou umožňuje analýzu struktury a stability biomakromolekul. Díky vysoké citlivosti a reprodukovatelnosti měření je možné sledovat termální přechody DNA, proteinů nebo interakce ligand–receptor při různých teplotních podmínkách.

Cíle a přehled studie

Článek představuje Agilent Cary Eclipse BioMelt systém, který spojuje xenonovou výbojku s vícebuňkovým peltierovým temperovacím příslušenstvím a integrovaným softwarem pro termické analýzy. Hlavním cílem je ukázat schopnost přesně měřit termické tání (Tm) a teplotně závislou fluorescenci s minimálním rizikem fotodegradace.

Použitá metodika

Měření se provádí pomocí rychlých ramp a cyklů nastavených ve software až do 50 fází experimentu. Teplotní stabilita (<±0,05 °C) a nízká variabilita mezi buňkami (<0,2 °C) zajišťují přesná data. Data mohou být zaznamenávána z teplotního čidla umístěného přímo v kyvetě.

Použitá instrumentace

• Spektrofluorimetr Agilent Cary Eclipse BioMelt
• Xenonová výbojka s 10letou zárukou a nulovým zahřívacím časem
• Vícebuňkový peltier pro teplotní řízení
• Integrovaný Thermal Melt Package software

Hlavní výsledky a diskuse

Experimentální ukázky zahrnují stanovení Tm 13mer PNA sondy s fluoresceinovým markerem, kde byly dosaženy přesné derivace tání. Systém prokázal vysokou citlivost, spolehlivost a schopnost měření více vzorků současně.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká reprodukovatelnost termálních experimentů v biochemii
• Úspora času díky rychlé přípravě a bezprostřednímu nasazení přístroje
• Bezpečná manipulace bez častých výměn lamp
• Možnost rozšíření o měření chemiluminiscence, fosforescence a časově rozlišené módy

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření automatizace a miniaturizace teplotních analýz, integrace s kapalinovou chromatografií a vývoj pokročilých softwarových modulů pro prediktivní modelování termální stability biomolekul.

Závěr

Agilent Cary Eclipse BioMelt nabízí komplexní řešení pro teplotně závislou fluorescenční spektroskopii s výjimečnou citlivostí a stabilitou. Neutralizuje riziko fotodegradace a zvyšuje produktivitu laboratoře v akademické i průmyslové sféře.