Micro Volume Quantitation Measurement of Nucleic Acid using Nano Stick with UV-1280

Význam tématu

Microobjemová kvantifikace nukleových kyselin je klíčová pro biochemické a molekulárně biologické aplikace, kde je vzorek omezený a vyžaduje vysokou přesnost při nízkém objemu. Tradiční 10mm kyvety spotřebují velké množství vzorku a vyžadují pečlivé čištění, což komplikuje rychlou analýzu.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo ověřit použitelnost přenosné mikrolitrové kyvety SINCO Nano Stick ve spojení se spektrofotometrem Shimadzu UV-1280 pro přesnou, reprodukovatelnou kvantifikaci DNA v rozsahu koncentrací 25–1000 ng/µl při vzorku pouhých 2–3 µl.

Použitá metodika a instrumentace

Pro přípravu byly použity sériální ředění kalf-tymoské DNA standardu v TE pufru (pH 8,0). Analytická měření probíhala ve spektrálním režimu (220–350 nm, střední rychlost skenu, krok 1 nm, štěrbina 5 nm) a ve speciálním režimu "DNA Quantitation" pro opakovaná stanovování při 260 nm.

Použitá instrumentace

• Shimadzu UV-1280 UV-VIS spektrofotometr
• SINCO Nano Stick mikrolitrová kyveta (0,5 mm dráha, objem 2–3 µl)

Hlavní výsledky a diskuse

Absorpční spektra ukázala výrazný vrchol při 260 nm a úroveň blízko nuly při 320 nm. Kalibrační křivka pro DNA vykázala lineární vztah y = 0,00093x – 0,00639 s korelačním koeficientem r² = 0,9995 v rozsahu až 1000 ng/µl. Precision test 10 opakování pro 500 ng/µl přinesl průměrnou absorbanci 0,451, směrodatnou odchylku 0,006 a RSD 1,32 %.

Přínosy a praktické využití metody

• Minimální spotřeba vzorku (2–3 µl) šetří cenné biologické materiály.
• Jednoduchá manipulace s mikrolitrovou kyvetou a rychlá výměna vzorků.
• Vysoká linearita a reprodukovatelnost vhodná pro rutinní laboratorní analýzy (genomika, QA/QC).

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další miniaturizace detekčních systémů, plná automatizace mikroobjemových analýz s přímou integrací do laboratorních informačních systémů, rozšíření na proteiny a multiplexní stanovení a využití pokročilých algoritmů pro optimalizaci dat.

Závěr

Komplexní systém SINCO Nano Stick a UV-1280 nabízí rychlé, spolehlivé a ekonomické řešení pro stanovení koncentrace nukleových kyselin v mikroobjemu se špičkovou linearitou a přesností.

Reference

Shimadzu (2015) Micro Volume Quantitation Measurement of Nucleic Acid using Nano Stick with UV-1280, Application AD-0097.