Quantification of total nucleic acids from unknown sources (DNA eq)

Význam tématu

Stanovení celkového obsahu nukleových kyselin je zásadní pro biochemické a molekulárně biologické aplikace, kde je potřeba přesně kvantifikovat DNA/RNA po extrakci z různých biotopů. Spolehlivá analýza zajišťuje kvalitu vzorků pro další experimenty, diagnostiku i průmyslovou kontrolu kvality.

Cíle a přehled studie / článku

Tento Application Note popisuje použití Unmix aplikace „Nucleic Acids (DNA equiv.)“ na systémech Lunatic a Little Lunatic. Cílem je oddělit spektrální složku nukleových kyselin od ostatních koabsorkujících látek v UV/Vis spektru a určit koncentraci vyjádřenou v ekvivalentech dsDNA.

Použitá metodika

Metoda je založena na dekonvoluci naměřeného UV/Vis spektra do tří složek:

• Profil nukleových kyselin: detekováno na vlnové délce A260, přepočet na ng/µl dsDNA ekvivalent
• Profil nečistot: absorpce dalších organických nebo anorganických látek v UV/Vis oblasti, reportováno v OD260
• Profil pozadí (turbidity): vystínění nežádoucích optických artefaktů, reportováno v OD260

Jako blank se vždy používá čistá voda. Kvalita fitu se hodnotí pomocí reziduálního procenta (RRSE), přičemž hodnota nad 2,5 % spouští varování.

Použitá instrumentace

• Systém Lunatic (Unchained Labs)
• Systém Little Lunatic (Unchained Labs)

Hlavní výsledky a diskuse

Aplikace spolehlivě identifikuje a kvantifikuje nukleové kyseliny smíšeného původu (bakterie, kvasinky, rostliny, plazmidy), včetně různých poměrů GC. Navíc detekuje a kvantifikuje nežádoucí látky (fenoly, thiokyanáty, proteiny, detergenty) a rušivou turbidity. Uživatelé získají graf spektrálního rozkladu, numerické hodnoty koncentrací a upozornění na překročené prahové limity.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlé a bezodpadové stanovení celkových nukleových kyselin bez nutnosti barvení nebo elektrofózy. Je vhodná pro vysokopropustné laboratoře, kontrolu kvality extrakcí nebo předběžné hodnocení vzorku před nákladnějšími testy.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření automatizace a integrace s laboratorními informačními systémy (LIMS). Dalším směrem je vylepšení algoritmů dekonvoluce pro specifické typy RNA a rozšíření aplikace na další biomolekuly, jako jsou proteiny a polysacharidy.

Závěr

Unmix aplikace na systémech Lunatic a Little Lunatic nabízí robustní nástroj pro přesné stanovení celkových nukleových kyselin z neznámých zdrojů. Díky snadné obsluze a rychlému vyhodnocení je ideální volbou pro moderní analytické laboratoře.