Anisotropy Measurement Using the Agilent Cary Eclipse Fluorescence Spectrophotometer

Význam tématu

Fluorescenční anisotropie představuje nedestruktivní a citlivou metodu sledování rotačních vlastností molekul. Díky odolnosti vůči vnějším vlivům přináší vysokou přesnost a opakovatelnost měření, což je zásadní pro analýzu biologických, polymerních i materiálových systémů, včetně fotosenzitivních vzorků.

Cíle a přehled studie / článku

Článek popisuje technické principy a výhody měření anisotropie pomocí spektrofotometru Agilent Cary Eclipse. Cílem je ukázat spolehlivost přístroje při charakterizaci molekulární velikosti, viskozity prostředí a interakcí ve vzorcích, které jsou náchylné k poškození světlem.

Použitá instrumentace

• Agilent Cary Eclipse Fluorescence spektrofotometr
• Vertikální a horizontální polarizátory před a za vzorkem
• Software Agilent Cary WinFLR pro řízené měření anisotropie

Hlavní výsledky a diskuse

Studie demonstrovala měření rhodaminu B v třech mediích: PMMA, ethylenglykolu a vodě. Anisotropie nejvyšší v PMMA odráží téměř nehybné molekuly, v ethylenglykolu střední hodnoty a ve vodě nízké. Další experimenty ukázaly, že intenzita fluorescence kolísá s teplotou, zatímco anisotropie přesně odráží změny pohyblivosti molekul bez vlivu koncentrace nebo teplotních artefaktů.

Přínosy a praktické využití metody

• Charakterizace viskozity a mikroprostředí polymerů
• Sledování proteinových interakcí a dynamiky v reálném čase
• Analyza ligandoveho vázání a membránové fluidity
• Bezpečné měření fotosenzitivních vzorků díky pulznímu zdroji lampy

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření aplikací v nanotechnologii pro kvantové tečky a makromolekuly, v pokročilém výzkumu proteinových komplexů s využitím homo-FRET a v monitorování dynamických procesů v materiálových vědách. Integrace s mikrofluidikou a umělou inteligencí může dále zlepšit automatizaci a interpretaci dat.

Závěr

Agilent Cary Eclipse přístroj poskytuje robustní řešení pro měření fluorescenční anisotropie v široké škále vzorků. Kombinace vysoké citlivosti, pulzního osvětlení a intuitivního softwaru umožňuje přesná a reprodukovatelná data bez poškození vzorku.

Reference

1. Gavin P.; Prescott M.; Fyfe D. J.; Comerford J. J. Minimizing photobleaching of Blue Fluorescent Protein using the Agilent Cary Eclipse fluorescence spectrophotometer; Agilent Technologies Application Note 5990-7791EN; 2011
2. Lakowicz J. R. Chapter 10 Fluorescence Anisotropy In Principles of Fluorescence Spectroscopy 3rd Edn Springer Science + Business Media; 2006