Quantification of total protein content

Význam tématu

Analytická kvantifikace celkového obsahu bílkovin v komplexních vzorcích je klíčová pro biochemické a biotechnologické aplikace. Přesné stanovení koncentrace umožňuje validaci přípravy vzorků, kontrolu kvality extrakčních a purifikačních procesů a optimalizaci laboratorních protokolů.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem předkládané aplikace je ukázat využití softwarového modulu Unmix na systémových zařízeních Lunatic a Little Lunatic k izolaci spektrálního příspěvku bílkovin z UV/Vis absorpčního spektra. Studie demonstruje postup analýzy, detekci interferujících složek a výpočet koncentrace pomocí definovaného extinkčního koeficientu.

Použitá metodika a instrumentace

Pro analýzu se používají přístroje Lunatic a Little Lunatic vybavené Unmix aplikací. Metoda založená na dekonvoluci UV/Vis spektra rozlišuje tři komponenty:

• Bílkoviny: stanovení koncentrace z absorpčního maxima při 280 nm a definovaného extinkčního koeficientu (E1%).
• Nečistoty: identifikace nukleových kyselin, azidu, proteázových inhibitorů, polysacharidů a detergentů absorbujících v UV/Vis oblasti.
• Pozadí: profil zákalu vzorku, který je odečten od původního spektra.

Jako blank se používá čistá voda. Uživatel zadává hodnotu E1% (výchozí 10).

Hlavní výsledky a diskuse

Unmix aplikace úspěšně odděluje spektrální složky a vypočítává koncentraci bílkovin. Kvalita fitu je hodnocena metrikou RRSE (residual relative squared error); hodnota nad 5 % signalizuje nekvalitní měření způsobené vysokým zakalením, neznámými látkami nebo nízkou koncentrací. Aplikace umožňuje generovat výstupy ve formátech HTML, XML, TXT a CSV (Lunatic navíc XLSX a PDF).

Přínosy a praktické využití metody

Metoda poskytuje rychlou, automatizovanou a objektivní kvantifikaci bílkovin ve vzorcích s přítomností rušivých látek. Díky rozlišení jednotlivých složek lze monitorovat čistotu vzorků, optimalizovat purifikační protokoly a zajistit konzistentní kontrolu kvality v laboratoři.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření využití algoritmů strojového učení ke zlepšení dekonvoluce složitých spekter a rozšíření databáze spektrálních modelů specifických biomolekul. Integrace s datovými platformami a online monitoring umožní real-time kontrolu procesů ve výrobě biotechnologických produktů.

Závěr

Unmix aplikace na platformě Lunatic představuje efektivní nástroj pro kvantifikaci celkového obsahu bílkovin ve složitých vzorcích. Díky schopnosti rozpoznat a odečíst rušivé složky dosahuje přesných výsledků vhodných pro výzkum i průmyslovou analytiku.

Reference

V textu nebyly uvedeny explicitní bibliografické odkazy.