Fast & accurate protein quantification with Lunatic

Význam tématu

Přesné a rychlé stanovení koncentrace proteinů je klíčové pro vývoj bioterapeutik, kontrolu kvality v laboratořích i průmyslovou analýzu. Tradiční metody často vyžadují manuální ředění vzorků, čištění kyvet a postupy s omezeným dynamickým rozsahem, což prodlužuje dobu analýzy a zvyšuje riziko chyb.

Cíle a přehled článku

Cílem technické zprávy je představit přístroj Lunatic a jeho aplikace pro bezředicí UV/Vis kvantifikaci proteinů s vysokou propustností. Ukázány jsou různorodé metody měření, včetně klasické A280 detekce, korekce rozptylu, dekonvoluce spekter i standardních kolorimetrických testů.

Použitá metodika a instrumentace

• Spektrofotometr Lunatic (High) pro 96 vzorků za 5 minut a Little Lunatic pro 16 vzorků za 2 minuty
• Spotřeba vzorku 2 µl, microfluidické desky a čipy s fixními délkami drah 0,1 a 0,7 mm
• Měření celého spektra od 230 do 750 nm, kapilární plnění vzorků bez rizika kontaminace či odparu
• Integrované aplikace: Protein (Turbidity), Protein (Single point), Protein (High concentration), Protein (Lysates), standardní křivky BCA, Bradford, Lowry
• Možnost automatizace s liquid handlerem a volitelný Modul 21 CFR Part 11 pro plnou validaci

Hlavní výsledky a diskuse

Porovnání klasické detekce A280 a korekce rozptylu ukázalo nižší systematickou chybu a širší dynamický rozsah až 0,03–275 OD. Měření monoklonálních protilátek prokázalo lineární odezvu až do 200 mg/ml, i přes spektrální nasycení, s vysokou opakovatelností. Aplikace Lysates s Unmix algoritmem umožnila dekonvoluci proteinu od koabsorbných látek jako DNA, detergenty a polysacharidy. Kolorimetrické testy BCA vykázaly v rozsahu 0,02–2 mg/ml lineární křivku a nízkou variabilitu mezi replikáty.

Přínosy a praktické využití metody

Bezředicí protokol šetří vzorek i laboratorní čas, minimalizuje riziko kontaminace a odparu. Široký dynamický rozsah a automatizace dávají Lunaticu přednost pro rutinní i vysoce koncentrovaná měření v bioterapeutickém vývoji, QC a výzkumu proteomiky.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření softwarových modulů o nové dekonvoluční algoritmy a strojové učení pro složité analytické úlohy. Integrace s LIMS a plná automatizace vysokopropustných workflow. Miniaturizace spotřeby vzorku a multiplexní čtení s cílem dalšího zvýšení efektivity laboratoře.

Závěr

Lunatic představuje robustní a univerzální platformu pro kvantifikaci proteinů, která díky mikrofluidice, širokému spektrálnímu rozsahu a integrovaným aplikacím přináší významné úspory času, materiálu a zvyšuje spolehlivost výsledků.

Reference

• Walker JM. 1996. The Bicinchoninic Acid (BCA) Assay for Protein Quantification. In The Protein Protocols Handbook. Humana Press.