Shimadzu Systémy pro Tm analýzu mohou urychlit proces vývoje a zlepšit kvalitu oligonukleotidových terapeutik. Řízení pomocí softwaru LabSolutionsTM umožňuje dodržování regulačních požadavků souvisejících s ER/ES a zvyšuje efektivitu analýzy tepelné stability (Tm analýza) nukleových kyselin.
Tm analýza plní důležitou úlohu při kontrole tepelné stability a sekvence nukleových kyselin. Při Tm analýze se na nukleové kyseliny ve dvojitých řetězcích působí teplem. Poté se měří změna absorbance (křivka tání), ke které dochází při zvyšování teploty a disociaci vláken na jednotlivá vlákna. Teplota tání (hodnota Tm) se určí jako teplota, při níž jsou molární podíly jednoduchých a dvojitých vláken stejné.
Systém pro Tm analýzu se skládá z následujících částí:
Shimadzu: Konfigurace systému pro Tm analýz
Systémy pro Tm analýzu se skládají ze spektrofotometru, 8článkového termoelektricky teplotně řízeného držáku kyvet TMSPC-8i a softwaru LabSolutions UV-Vis Tm. Mohou automaticky určovat hodnoty Tm na základě měření křivky tání pomocí metody průměru nebo metody derivace. Systém LabSolutions UV-Vis Tm může poskytovat nejvyšší úroveň integrity dat v oboru, pokud je propojen se systémem LabSolutions DB/CS, který má rozsáhlé zkušenosti z používání s LC, GC a mnoha dalšími analytickými přístroji.
Shimadzu: Tm analýza_Systém LabSolutions UV-Vis Tm může poskytovat nejvyšší úroveň integrity dat v oboru, pokud je propojen se systémem LabSolutions DB/CS
Poznámka: LabSolutions DB UV-Vis: Jedná se o samostatný systém správy databáze, jehož analytický software je na jednom počítači. Systém LabSolutions CS: Server, klient a akviziční jednotka jsou připojeny v síti. Data všech zařízení jsou centrálně spravována databází vybudovanou na serveru. Správa uživatelů a oprávnění jsou u tohoto systému řízeny centrálně.
Tento mikro-vícekyvetový systém lze použít k měření osmi vzorků současně za stejných podmínek měření. Kromě předchozích modelů mikro-vícekyvetových systémů s délkou optické dráhy 10 mm (s minimálním objemem vzorku 100 μl) byl do nabídky pro uspokojení potřeb vysoce citlivého měření přidán nový model s délkou optické dráhy 1 mm (s minimálním objemem vzorku 10 μl) pro měření mikromnožství drahých vzorků. Kyvety s délkou optické dráhy 1 mm mohou způsobovat problémy s odpařováním vzorků, ale nová metoda těsnění *, která potlačuje odpařování vzorků utěsněním horní strany kyvety, umožňuje spolehlivé měření vzorků s vysokou teplotou tání.
Shimadzu: Typy mikro-vícekyvetových systémů
Shimadzu: Křivka tání nukleové kyseliny (primer M13) při použití mikro-vícekyvetových systémů s optickou dráhou o délce 1 mm
Tuto metodu utěsnění podpořil profesor Junji Kawakami (Department of Nanobiochemistry, Faculty of Frontiers of Innovative Research in Science and Technology (FIRST), Konan University, Japan). Projekt byl podpořen AMED v rámci grantů číslo JP21ae0121022, JP21ae0121023, JP21ae0121024 (vedoucí projektu: Satoshi Obika).
LabSolutions UV-Vis Tm dokáže během měření přenášet hodnoty teploty, absorbance a času do souboru Excel® v reálném čase. Přenosem hodnot Tm získaných ze vzorků s různými úrovněmi koncentrace do komerčního tabulkového softwaru lze snadno analyzovat změny hodnot Gibbsovy volné energie používané jako ukazatel úrovně aktivity léčiv nebo termodynamických vlastností, jako je entropie nebo entalpie.
Shimadzu: Přenosová funkce v reálném čase a analýza termodynamických parametrů
Konvenční Tm analýza vyžaduje několik kroků, včetně kontroly UV-Vis spektra, žíhání, měření křivky tání a analýzy dat, přičemž záznam a správa dat se provádí odděleně. V minulosti bylo měření spektra, žíhání a analýza dat křivky tání diskrétní. Software LabSolutions UV -Vis Tm podporuje celý proces od měření až po analýzu (výpočet hodnoty Tm) pomocí menu, které je snadno pochopitelné i pro ty, kteří s analýzou Tm začínají. Dosahuje bezproblémového pracovního postupu a efektivní analýzy Tm tím, že automaticky provádí časově náročné kroky žíhání, korekce (korekce vlnové délky pozadí a teplotního blanku) a výpočtu hodnoty Tm (metody průměru nebo derivace). Kromě toho jsou data měření a hodnoty analýzy ukládány jako sada a různá nastavení a historie operací jsou spravovány pomocí záznamu Audit Trail.
Shimadzu: Efektivní automatizovaný pracovní postup
Nastavte vzorek a změřte spektrum.
Shimadzu: Měření spektra vzorku
Spektrum a křivku tání lze snadno potvrdit přepnutím záložek
Shimadzu: Přepínání mezi spektrem a křivkou tání
Zvyšováním a snižováním teploty vzorku se nukleové kyseliny stávají jednovláknovými a poté se opět spojují do dvouvláknových. Tím se snižuje počet vazebných neshod, což umožňuje stabilní analýzu.
Shimadzu: Automatické žíhání
Shimadzu: Automatické žíhání a nastavení teploty
Měří změnu absorbance během procesu tání nukleových kyselin z dvojitých vláken na jedno vlákno při zvyšující se teplotě. Hodnota Tm (teplota tání, při níž se molární podíly dvouvláknových a jednovláknových molekul rovnají) se vypočítá metodou průměru, která určuje hodnotu na základě průsečíku křivky tání a střední čáry tečen vybraných úseků v oblasti před a po přechodu, nebo metodou derivace získanou z maximální hodnoty první derivace.
Shimadzu: Měření Tm
Shimadzu: Nastavení analýzy Tm
Shimadzu: Protokol aplikace (LabSolutions DB)
Shimadzu: Automatický výpočet hodnot Tm analýzy
Shimadzu: Příklad Tm analýzy